卵黄抗体(IgY)指从免疫禽蛋中提取出的针对特定抗原的抗体。自1893年Klemperer首次报道鸡蛋中存在抗体以来，卵黄抗体的研究不断深入，目前在卵黄抗体的形成、生物学特性等方面已研究得比较清楚，并且卵黄抗体作为诊断试剂和防治药物的研究愈来愈受到关注。本文就免疫鸡卵黄抗体的研究进展作一综述。1、卵黄抗体的形成禽类的免疫系统包括细胞免疫和体液免疫，分别受胸腺和法氏囊的控制。当机体受到外来抗原刺激后，法氏囊内的B细胞分化成为浆细胞，分泌特异性抗体进入血液循环，当血液流经卵巢时，特异性抗体(主要是IgG)在卵细胞中逐渐蓄积，形成卵黄抗体；当卵细胞分泌进入输卵管时，流经输卵管的血液中含有的特异性抗体(主要是IgA和IgM)进入卵清中，形成卵清抗体。IgG移行进入卵细胞是受体作用的结果，因而IgG可在卵细胞中大量蓄积，浓度高于血液中的IgG。与卵黄抗体相比，卵细胞在输卵管中移行的时间较短，因而卵清抗体含量极微。卵黄抗体在禽胚孵化过程中逐渐进入禽胚血液，为刚出壳雏鸡提供被动免疫保护，在雏鸡疾病预防中具有重要作用，但同时也会干扰鸡疫苗的免疫效果。2、IgY的性质IgY的性质与哺乳动物的IgG相似。正常鸡IgY的分子量约为180KDa，由两条轻链(2L)和两条重链(2H)组成，分子量分别为60-70KDa和22-30KDa。其等电点约为5.2。IgY与一般哺乳动物IgG相比，IgY具有较强的耐热、耐酸、抗离子强度和一定的抗酶降解能力。在低于75℃条件下，IgY具有良好的热稳定性。IgY制剂在4℃贮存5年或在室温贮存6个月其活性仍无明显变化或下降，65℃时可保持24h以上，70℃时加热90min后其活性才明显下降60℃，30min条件下巴氏消毒不影响IgY；高于80℃，大部分IgY失去活性。IgY在pH4.0-11.0时比较稳定，pH3.0-3.5时活性迅速下降，pH12时活性亦有所下降。IgY对胃蛋白酶有较高的抵抗力，但对胰蛋白酶十分敏感。将胃蛋白酶和IgY在pH2.0温育1h后，几乎所有活性丧失，但在pH4.0时1h后可保持91%的活性，甚至温育10h后仍有63%活性。IgY分别与胰蛋白酶和胰凝乳酶温育8h，活性分别保持39%和41%。3、IgY的作用机理特定病原菌的卵黄抗体能直接黏附于病原菌的细胞壁上，改变病原细胞的完整性，直接抑制病原菌的生长；卵黄抗体可黏附于细菌的菌毛上，使之不能黏附于肠道黏膜上皮细胞；一部分卵黄抗体在肠道消化酶作用下，降解为可结合片段，这些片段含有抗体的可变小肽(Fab)部分，这些小肽很容易被肠道吸收，进入血液后能与特定的病原菌黏附因子结合，使病原菌不能黏附易感细胞而失去致病性，而IgY的稳定区(Fe部分)留在肠内。4、IgY分离、提纯方法卵黄中的主要成分是蛋白质和脂肪，其比例为1：2。大部分蛋白质都是脂蛋白，存在于卵黄颗粒中，不溶于水，只有卵黄球蛋白(α、β、γ)是水溶性的，而IgY是γ卵黄球蛋白。因此IgY的分离纯化首先需要有效地去除卵黄中的脂类，从水溶性蛋白中分离IgY。多年来，已建立了许多较为高效而经济的方法，这些方法大多以PEG、硫酸葡聚糖、天然胶，如藻酸钠、角叉聚糖或乙醇沉淀等方法初步纯化蛋白质。1980年，Polson首先提出聚乙二醇(PEG)两步沉淀法，分别用终浓度为3.5%和12%的PEG分步沉淀，用硫酸铵盐析法去除PEG。1985年，在此基础上提出了冷乙醇沉淀的改进方法，使产量提高，而且能有效地去除残留PEG。1981年Jensensius等提出了硫酸葡聚糖沉淀法(DS法)，PEG法和DS法的产量相当，但提取的IgY制品含有一定量的杂蛋白。Bade和Stegemann(1984)用预冷的丙烷和丙酮(-20℃)沉淀蛋白质并去除脂质，经DEAE柱层析进一步纯化，其IgY抗体活性与用Polson法提纯的IgY之间无明显差别，且稳定性好，经3次以上冻融，抗体活性未见改变。1992年Akita等用水稀释法(WD)提纯IgY，每个卵黄可获得100mg以上的IgY。此后，Akita等比较了WD法、PEG法、DS法和黄原胶法(Xanthan法)的提纯效果，结果表明：WD法产量最高，其次为DS法，WD法更适合大规模生产。1993年，Horikoshi提出了冷乙醇分级离心的方法，分别用60%、30%、25%的冷乙醇沉淀离心，得到纯度达99%以上的IgY。此法适用于大规模制备IgY。工业上大规模生产IgY的方法有：超临界二氧化碳气体抽提法、卡拉胶法、硫酸铵盐析法。5、IgY在动物疾病防治方面的应用5.1 IgY在动物疾病预防方面的应用研究表明，IgY能抵抗幼龄动物肠道中胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的消化。故常在幼畜饲料或添加剂中加入一定量的针对某些特定疾病的IgY，以使其获得有效的被动免疫。何月英等利用小鹅瘟强毒制备的卵黄抗体，对2-3日龄雏鹅进行预防，其保护率高达100%。杨晓梅等用鸭病毒性肝炎I型鸡胚毒免疫鸡，制备的鸡抗鸭病毒性肝炎高免卵黄抗体，经实际应用于预防时，雏鸭的平均成活率为96.9%。5.2 IgY在动物疾病治疗方面的应用目前，卵黄抗体己被广泛应用于许多疾病的防治。汪铭书应用抗鸭病毒性肝炎(DHV)的卵黄抗体治疗人工感染的鸭时，当用1万倍LD50强毒时保护率可达到100%。张英等用抗小鹅瘟的卵黄抗体治疗发病鹅群，治愈率为95.2%。此外，应用多种病原菌免疫制备的卵黄抗体还可以防治多种病原菌的感染。詹丽娥等用IBD、ND和EDS-76三联高免卵黄抗体治疗上述三种疾病，总有效率可达50%以上。日本成功地从鸡蛋中提取出能够杀死幽门螺旋杆菌的抗体，并以这种抗体为原料制成了能杀死人体内幽门螺旋杆菌的酸奶。用卵黄抗体治疗疾病，安全、高效且无公害，我国已有商品化的卵黄抗体供应。5.3 1gY在动物疾病诊断方面的应用卵黄抗体和哺乳动物免疫球蛋白有许多不同之处，如它不与金色葡萄球菌A蛋白结合，不与哺乳动物Fc受体结合，对哺乳动物补体无固定作用等，这使得卵黄抗体在检测诊断上具有更强的特异性和灵敏度，所以卵黄抗体可以应用于免疫荧光试验、ELISA试验、免疫扩散、免疫电泳等。郑厚旌等用卵黄琼扩实验检验卵黄中的IBD抗体水平，结果表明用卵黄琼扩试验替代血清琼扩试验检测IBD抗体水平是可行的，并且具有经济、省力、省时的特点。此外卵黄抗体有望取代传统的多克隆抗体的生产，获取大量更有效的抗体，同时也可减少对动物的副反应，提高动物的福利。6、IgY开发前景IgY作为替代抗生素的新型饲料添加剂正在引起人们的关注，IgY取代抗生素用作生长促进剂，不会产生药物残留，是一种安全的绿色添加剂。生产技术较为成熟：用鸡卵黄大量生产、制备多克隆抗体是近年来抗体制备技术中新兴的研究领域。IgY产量高，价格低廉。使用IgY技术生产免疫球蛋白，可以减少对动物的应激，提高动物的福利。年龄较大的动物会导致IgY分解失活，然而通过包埋处理可避免这一问题。Shimizu等(1993)用脂质体包埋IgY，在pH2.8的胃蛋白酶中37℃温育1h，包埋的IgY仍可保存80%的活性。综上所述，鸡卵黄免疫球蛋白是一种高产、优质的多克隆抗体，而且鸡大规模工业化饲养成本低，经济方便，同时制备IgY的工艺相对简单。因此，IgY在生物制品的开发和疾病的防治方面具有广阔的前景。应用卵黄抗体防治疾病也有不可避免的缺点，如可能带有蛋传染性疾病的病原，对养禽业存在潜在的威胁。